Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用)

产品描述

《Quick Cell快速支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否含有支原体污染，该试剂盒仅用于基础科研。

哺乳动物细胞的培养，支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。本试剂盒可以检测：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体(注：M.为Mycoplasma的缩写)。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上，本试剂盒产品全部可以检测。绝大多数支原体污染集中于前8种。注意：本试剂盒无法检测Ureaplasma Urealyticum支原体！Ureaplasma Urealyticum在支原体污染种极其罕见。

与PCR法检测支原体比较，本试剂盒产品优势优势显著：

试剂盒组成

（1）溶液Ⅰ：1150 μL (50次检测)

（2）溶液Ⅱ：56 μL(50次检测)

（3）溶液Ⅲ：指示剂，25 μL(50次检测)

（4）阳性支原体DNA：50 μL

（5）矿物油：1500 μL

注：1)本试剂盒所指50次测试包含阴性对照、阳性对照，并非50个样品，因每次测试均需设置对照，测试样品数根据实验安排确定，理论上一次最多可测试48个样品。2)使用前用离心机轻微离心，以免管壁上粘附损失试剂减少检测次数。

使用方法

1. 待测样品的准备：为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品zui好来源于至少培养三天且汇合度在70-90%左右的细胞培养上清(贴壁细胞)，无需离心。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，至少让细胞生长3天再取培养液进行检测，也无需离心，哺乳动物细胞的存在不会影响检测结果。

注：收集的待测细胞培养液样品如果不立即检测，请放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室温或4℃冰箱。样品在-20℃至少可以保存一个月，在-80℃可以长期保存。此外，为了节约检测成本，可以将不同时间收集的样品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起检测。

2。 反应体系的配制

表1：恒温反应体系的配制

(1)    将溶液Ⅰ、溶液Ⅲ从-20℃冰箱中取出，室温放置待其融化，溶液Ⅱ从-20℃冰箱中取出后置于冰上备用。溶液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm离心30秒，用移液枪吹洗均匀。三种试剂按表1比例混合。

注：1）如有多个样品，可先将反应体系配置好，建议溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系数1.08，保证每个反应管中的反应液足量，避免移液时损失。举例：如果待测样品为3个(加上1个阴性和1个阳性对照)，则样品总数为5个。溶液Ⅰ的总体积应该为23×5×1.08=124.2μL，溶液Ⅱ的总体积为1×5×1.08=5.4μL，溶液Ⅲ的总体积为0.18×5×1.08=0.972 μL将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ混合均匀。如一次用完一个试剂盒，可直接往溶液Ⅰ中加入50μL溶液Ⅱ、7.5μL溶液Ⅲ混匀备用。

2）溶液Ⅱ必须一直在-20 ℃冰箱中保存，并在操作时置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20 ℃条件下仍为液态，不需置于室温。

(2)将上述配制好的反应体系，吹打均匀后，按每管24 μL分装到0.2 mL的PCR管中。尽量保证每管的反应液体积一样。 PCR管应该使用透明度良好的薄壁PCR管。

(3)往测试管(Test)中加入1μL待测细胞培养液；往阳性对照管(Positive)中加入1 μL阳性支原体DNA；往阴性对照管(Negative)中加入1μL灭菌水；反应液的总体积为25 μL。

注1：装有阳性支原体DNA的螺口管开盖之前，用力甩一下，或者用迷你离心机即可。

注2：进行反应体系配制的房间，与进行样品前处理、加阳性对照DNA、样品DNA的房间zui好分开。

3。 反应

PCR仪设置程序：61℃，60 min；10℃, forever；热盖温度，100 ℃。

注意：若实验室反应场所没有PCR仪，可用水浴锅代替，水浴锅显示温度与实际温度的温差不超过0.5℃，另须往每个反应管内加入25μL矿物油，以防止水份挥发，然后盖上盖子，将反应管插入带孔的漂板内，放入已经升温到61℃的水浴内，准确反应60分钟。

4. 结果判断

61℃反应60分钟后，立刻取出反应管，放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒为背景，通过反应管溶液颜色的变化，即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色，则说明有支原体污染；如果为紫红色，则说明没有支原体污染(如图1)。

注：在61℃反应的时间必须准确计时,最多不得超过5分钟,以免出现假阳性。必须在反应后2小时内进行结果判断,避免室温下扩增反应进行,影响结果判别。

注意事项

1．必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体,尽量用新购移液器、新开封的枪头操作；整个操作过程,佩戴口罩,不要开口说话。由于本试剂盒非常灵敏,移液枪如吸附有,或者人为带入支原体均有可能造成假阳性。

2．zui好使用带滤芯的吸头吸取溶液和阳性支原体等。如果没有带滤芯的吸头，至少应该使用新开封的吸头。

3．检测过程中,用过的各类吸头、离心管务必小心处理,应装入含有半瓶水的带盖的、可密封的垃圾瓶内。反应后的PCR管,不要开盖,用过后将其用自封袋密闭,扔到远离细胞房的独立垃圾桶内。

4．如果细胞被支原体污染，可以选购本公司或其他供应商提供的去除试剂今早去除。

Q：如实验室无PCR仪怎么办？

A：该试剂只需保持在61℃进行反应，如实验室无PCR仪，也可将反应置于水浴锅中恒温（尽量保证温度起伏不超过0.5℃）保持即可

Q：快速支原体检测的原理是？

A：快速法基于支原体DNA检测，所选序列保守，反应体系经过优化，设有阴性对照，阳性对照，对反应中可能影响结果的因素，第yi时间可以发现