Quick Cell支原体快速检测试剂盒是《Quick Cell快速支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否含有支原体污染,该试剂盒仅用于基础科研。
产品名称 | 货号 | 规格 | 保存 | 价格 |
Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用) | AC16L061 | 50T | -20℃ | 1350 |
产品描述
《Quick Cell快速支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否含有支原体污染,该试剂盒仅用于基础科研。
哺乳动物细胞的培养,支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测。本试剂盒可以检测:(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体(注:M.为Mycoplasma的缩写)。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上,本试剂盒产品全部可以检测。绝大多数支原体污染集中于前8种。注意:本试剂盒无法检测Ureaplasma Urealyticum支原体!Ureaplasma Urealyticum在支原体污染种极其罕见。
与PCR法检测支原体比较,本试剂盒产品优势优势显著:
比较内容 | 支原体检测PCR法 | Quick Cell 快速支原体检测试剂盒 |
操作时间 | 3小时 | 1小时 |
是否需要样品处理 | 样品需预处理,DNA提取 | 无需样品处理,直接使用上清 |
灵敏度 | 灵敏度低 | 较PCR法提高100-1000倍 |
是否需要电泳 | 需要电泳及染色 | 不需电泳,目测结果 |
试剂盒组成
(1)溶液Ⅰ:1150 μL (50次检测)
(2)溶液Ⅱ:56 μL(50次检测)
(3)溶液Ⅲ:指示剂,25 μL(50次检测)
(4)阳性支原体DNA:50 μL
(5)矿物油:1500 μL
注:1)本试剂盒所指50次测试包含阴性对照、阳性对照,并非50个样品,因每次测试均需设置对照,测试样品数根据实验安排确定,理论上一次最多可测试48个样品。2)使用前用离心机轻微离心,以免管壁上粘附损失试剂减少检测次数。
使用方法
1. 待测样品的准备:为了准确判断细胞是否有支原体的污染,待测的细胞培养液样品zui好来源于至少培养三天且汇合度在70-90%左右的细胞培养上清(贴壁细胞),无需离心。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后,至少让细胞生长3天再取培养液进行检测,也无需离心,哺乳动物细胞的存在不会影响检测结果。
注:收集的待测细胞培养液样品如果不立即检测,请放于-20℃或-80℃冰箱保存,不得放于室温或4℃冰箱。样品在-20℃至少可以保存一个月,在-80℃可以长期保存。此外,为了节约检测成本,可以将不同时间收集的样品放于-20℃或-80℃冰箱保存,而后一起检测。
2。 反应体系的配制
表1:恒温反应体系的配制
组 份 | 理论单个样品用量 | 样品总数 | 总体积 |
溶液Ⅰ | 23 μL | N | 23×N×1.08 μL |
溶液Ⅱ | 1 μL | N | 1×N×1.08 μL |
溶液Ⅲ | 0.18 μL | N | 0.18×N×1.08 μL |
(1) 将溶液Ⅰ、溶液Ⅲ从-20℃冰箱中取出,室温放置待其融化,溶液Ⅱ从-20℃冰箱中取出后置于冰上备用。溶液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm离心30秒,用移液枪吹洗均匀。三种试剂按表1比例混合。
注:1)如有多个样品,可先将反应体系配置好,建议溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系数1.08,保证每个反应管中的反应液足量,避免移液时损失。举例:如果待测样品为3个(加上1个阴性和1个阳性对照),则样品总数为5个。溶液Ⅰ的总体积应该为23×5×1.08=124.2μL,溶液Ⅱ的总体积为1×5×1.08=5.4μL,溶液Ⅲ的总体积为0.18×5×1.08=0.972 μL将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ混合均匀。如一次用完一个试剂盒,可直接往溶液Ⅰ中加入50μL溶液Ⅱ、7.5μL溶液Ⅲ混匀备用。
2)溶液Ⅱ必须一直在-20 ℃冰箱中保存,并在操作时置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20 ℃条件下仍为液态,不需置于室温。
(2)将上述配制好的反应体系,吹打均匀后,按每管24 μL分装到0.2 mL的PCR管中。尽量保证每管的反应液体积一样。 PCR管应该使用透明度良好的薄壁PCR管。
(3)往测试管(Test)中加入1μL待测细胞培养液;往阳性对照管(Positive)中加入1 μL阳性支原体DNA;往阴性对照管(Negative)中加入1μL灭菌水;反应液的总体积为25 μL。
注1:装有阳性支原体DNA的螺口管开盖之前,用力甩一下,或者用迷你离心机即可。
注2:进行反应体系配制的房间,与进行样品前处理、加阳性对照DNA、样品DNA的房间zui好分开。
3。 反应
PCR仪设置程序:61℃,60 min;10℃, forever;热盖温度,100 ℃。
注意:若实验室反应场所没有PCR仪,可用水浴锅代替,水浴锅显示温度与实际温度的温差不超过0.5℃,另须往每个反应管内加入25μL矿物油,以防止水份挥发,然后盖上盖子,将反应管插入带孔的漂板内,放入已经升温到61℃的水浴内,准确反应60分钟。
4. 结果判断
61℃反应60分钟后,立刻取出反应管,放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒为背景,通过反应管溶液颜色的变化,即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色,则说明有支原体污染;如果为紫红色,则说明没有支原体污染(如图1)。
注:在61℃反应的时间必须准确计时,最多不得超过5分钟,以免出现假阳性。必须在反应后2小时内进行结果判断,避免室温下扩增反应进行,影响结果判别。
注意事项
1.必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体,尽量用新购移液器、新开封的枪头操作;整个操作过程,佩戴口罩,不要开口说话。由于本试剂盒非常灵敏,移液枪如吸附有,或者人为带入支原体均有可能造成假阳性。
2.zui好使用带滤芯的吸头吸取溶液和阳性支原体等。如果没有带滤芯的吸头,至少应该使用新开封的吸头。
3.检测过程中,用过的各类吸头、离心管务必小心处理,应装入含有半瓶水的带盖的、可密封的垃圾瓶内。反应后的PCR管,不要开盖,用过后将其用自封袋密闭,扔到远离细胞房的独立垃圾桶内。
4.如果细胞被支原体污染,可以选购本公司或其他供应商提供的去除试剂今早去除。
Q:如实验室无PCR仪怎么办?
A:该试剂只需保持在61℃进行反应,如实验室无PCR仪,也可将反应置于水浴锅中恒温(尽量保证温度起伏不超过0.5℃)保持即可
Q:快速支原体检测的原理是?
A:快速法基于支原体DNA检测,所选序列保守,反应体系经过优化,设有阴性对照,阳性对照,对反应中可能影响结果的因素,第yi时间可以发现